挂蛋白有什么作用？
在科研中我们经常会遇到需要分离提取某些生物大分子（如蛋白、核酸等）的情况，常用的方法有盐析、凝胶电泳、超滤、色谱法等。其中色谱法可以分为很多种，如分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和分子筛色谱等等。今天主要和大家分享的是利用色谱法制备纯化蛋白质的过程及需要注意的细节。 首先我们需要准备一个容器，并加入载体蛋白（此处可使用琼脂糖凝胶，但效果没有凝胶电泳好），用缓冲溶液定容至合适的体积，混匀后装入层析柱内待用。 在实验操作前我们可以通过扫描电镜观察目的蛋白的亚细胞定位情况，以确定是否与载体蛋白相互混合。如果目的蛋白不与载体蛋白混合，则可以继续下一步操作；若存在结合，则需要使用洗脱液进行反复冲洗去除残留的载体蛋白，从而获得较纯的目的蛋白。 为了获得纯度较高的目的蛋白，我们在装填色谱柱时可以在柱底部分填充少量的无机凝胶（如醋酸钙），这样当样品溶液经过时，可以进一步增加蛋白质与载体的相容性，使更多的蛋白质与载体结合。 但如果我们得到的蛋白质与预期不相符，或含量过低而难以通过下一步实验进行研究，则可以考虑重新提取。一般来说，影响蛋白质提取率的因素包括蛋白酶活性、样本类型、溶解状态、研磨时间、加热时间及磷酸钾浓度等。
我们以胃蛋白酶为例，通过改变其激活剂（phosphate buffer）的浓度，来观察对胃蛋白酶活力以及可溶性蛋白含量的影响。 当缓冲液的pH值低于2.0时，胃蛋白酶会丧失活性，所以我们不能在过低的pH值下收集上清液。通常来说，在酸性条件下（pH值＜6.0），胰蛋白酶和胃蛋白酶能够充分释放，因此在此范围收集的上清液即可提供较多的可溶性蛋白。